Microscopia+como+herramienta+de+estudio

Técnicas para el estudio de las células I. Microscopio de luz Fuente luz visible, la luz atraviesa el especimen por lo tanto el especimen tiene un grado de transparencia, la luz es recojida por una serie de lentes y esto magnifica la imagen A. Magnificación: cuánto se puede agrandar una imagen, dependiendo de los objetivos es la magnificacion (poder de magnificacion X 10) B. Resolución: habilidad para poder distinguir dos puntos cercanos como dos entidades separadas. Apertura numérica (AN) -Depende de la calidad del objetivo -Es una función de su capacidad de colectar la luz -Indica el poder de resolución de un lente -Cuanto mayor sea la apertura numérica mayor es la resolución y la brillantez de la imagen Factores que influyen -Esta depende del largo de onda -Cuan ancho es el cono -Como la luz pasa por el objetivo -Por la apertura numerica de las lentes C. Contraste Efectos de interferencia - Tipos y usos Tinciones

II. Microscopio de fluorescencia A. Fluoróforos o fluorocromos -son moléculas que al ser excitadas con la energía de una determinada longitud de onda son capaces de emitir energía de una longitud de onda mayor. B. Inmunofluorescencia - es una técnica que emplea anticuerpos conjugados a fluorocromos. 1.Directa -permite la detección de antígenos en un paso. Utiliza anticuerpos conjugados a isotiocianato de fluoresceína. La lectura se realiza en un microscopio de fluorescencia, que emite luz ultravioleta de una determinada longitud de onda. 2.Indirecta -permite la detección de anticuerpos circulantes. -Los antígenos desencadenan una respuesta inmunológica en nuestros cuerpos. Por tal razón, éstos son reconocido por anticuerpos. En el proceso de inmunocitoquímica indirecta el antígeno es reconocido por el anticuerpo primario, quien a la vez, provee el lugar de anclaje para el anticuerpo secundario. Este proceso se utiliza como método de marcaje, ya que el anticuerpo secundario contiene un fluoróforo que permite su detección. Es importante reconocer que el anticuerpo secundario no reconoce al antígeno, ya que su función es reconocer al anticuerpo primario. Así el anticuerpo secundario nos provee una manera de marcar células para un mejor estudio. 3.Anticuerpos monoclonales -es un anticuerpo homogéneo producido por una célula híbrida producto de la fusión de un clon de linfocitos B descendiente de una sola y única célula madre y una célula plasmática tumoral. -tienen la capacidad de reconocer moléculas con diferente estructura química -reconoce un único tipo de lugar antigénico -especifidad uniforme 4.Quimeras fluorescentes

III. Microscopio electrónico A. Usos Posee resolución bastante alta, teóricamente de unos 0.005nm. Se limita a especimenes muertos. B. Resolución vs. Detección Que el instrumento tenga una resolución alta no significa que el especimen se pueda distinguir. Es por esto que tenemos que analizar cuál instrumento es más útil de acuerdo a lo que se está buscando; por ejemplo: si queremos analizar un organelo el cual esté rodeado de otros organelos parecidos. Puedes observarlo por un microscopio electrónico, pero probablemente no lo puedas distinguir. Entonces, aunque el instrumento tenga una buena resolución y puedas observar los organelos, no te ayudó mucho porque no lo pudiste distinguir. Sin embargo, al utilizar la técnica de flourescencia no obtienes la misma resolución, pero si te ayuda a distinguir y detectar el organelo que estabas buscando.